百年老病，非洲猪瘟诊断技术！

非洲猪瘟是个百年老病，来到中国后发生了前所未有的“变异”，这种变异使得原有的百年检测经验需要及时更新，因此我国2020年12月14日发布了GB/T18648-2020 非洲猪瘟诊断技术；世界动物卫生组织（OIE）陆生动物诊断测试和疫苗手册于2021年5月对非洲猪瘟一节进行了更新，2021年3月和11月我国官方权威机构相继发布了《养猪场非洲猪瘟变异株监测技术指南》和《养殖场非洲猪瘟病毒变异株防控技术指南》。

简介

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的，以全身出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征的一种猪的急性、热性、高度传染性疾病。临床以高热、食欲不振、皮肤和内脏器官出现、高死亡率为特征。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告的动物疫病，我国农业部2008年新修订的《一、二、三类动物疫病病种名录》将其列为一类动物疫病。

非洲猪瘟病毒是二十面体对称的、具有囊膜双链 DNA 病毒，病毒基因组为末端共价闭合的单分子线状双链DNA，长度在170~190 kb之间。分类上属非洲猪瘟科，非洲猪瘟病毒属成员 ，而且是其中的唯一成员。非洲猪瘟病毒对外界的抵抗力强，有较强的酸碱耐受性。

诊断标准

SN/T 1559-2010 《非洲猪瘟检疫技术规范》

GB/T 18648-2002 《非洲猪瘟诊断技术》

T/CVMA 5-2018《非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法》

实验室检测

血清学检测方法：

1.酶联免疫吸附实验：敏感性好，特异性强，适合大批量的检测。

2.胶体金免疫层析试纸条：速度快，效率高，方便操作。

3.荧光抗体实验法：该方法具有快速、经济、敏感性和特异性高等优点，但需要专业试验人员，同时需要荧光显微镜及高质量的荧光标记抗体。

4.间接免疫荧光实验：可用于无非洲猪瘟流行地区酶联免疫吸附实验检测阳性的血清，以及来自地方性流行的地区经酶联免疫吸附实验检测无法确定结果的血清确证试验。该方法的优点是当酶联免疫吸附实验检测结果不确定或制备抗原困难或复杂时，可选用此法。

分子生物学检测方法：

1.普通PCR ：PCR具有简单快速、灵敏度高和特异性比较强的优点，是目前最基础的实验室检测方法。

2.荧光定量PCR：实时荧光定量PCR比常规PCR具有更高的敏感性和特异性，可同时快速检测大批量样品。减少跑胶污染，是目前实验室最常用的检测方法。

3.重组酶聚合酶扩增技术：它是一种可以替代传统PCR的新型核酸检测技术，该方法操作简单、反应快速、检测成本低。

4.线性指数聚合酶链式反应：线性指数聚合酶链式反应是不对称PCR的一种形式，该方法用于检测组织样品的病毒，其敏感性可以达到大约1拷贝，灵敏性较高。

5.环介导恒温扩增技术：技术操作简单、灵敏、快速，检测成本远低于荧光定量PCR，且不需要特殊仪器设备，具有较高的临床实用性。

6.探针杂交技术：探针杂交技术检测灵敏度高，能有效排除PCR检测过程中的非特异性结果，可以在酶标板中实现批量反应，为非洲猪瘟病毒核酸检测方法开辟了新的途径，但该方法的建立难度较高、操作较繁琐，对试验人员技术水平要求较高。

实验室生物安全

“从事高致病性病原微生物分离和动物体上相关实验活动的，应在生物安全三级以上实验室进行。

开展非洲猪瘟病毒核酸和抗体检测的实验室，其设施设备配置应符合GB 19489中生物安全二级（BSL-2）及以上实验室的要求。样品灭活前的活动在生物安全柜中操作，废弃物及检测完样品应经高压蒸汽等消毒处理。”