目前,非洲猪瘟多点频发,防不胜防。对于急性发病、死亡的病例,需要快速判断,做出迅速的应对措施。如何在较短是时间内取得是否为非洲猪瘟的结论尤为重要。
常规的荧光定量PCR敏感性高,特异性强,对于低毒量的非洲猪瘟病毒感染可以提供重要的参考线索。但是,荧光定量PCR实施之前的核酸提取纯化过程极其繁琐,对技术操作人员的要求极为苛刻,多数荧光定量PCR检测失败的原因均来自于核酸纯化过程。值得一提的是机体提取,更可谓良莠不齐,真假难辨。目前值得信赖的核酸纯化首推手动过膜柱法提取,敏感性高出机器提取1-2个数量级。
而对于急性病例,诊断手法上可以两者相害取其轻,利用PCR的敏感性,并简化繁琐的核酸提取程序,缩短操作时间,帮助生产者快速做出决策,会产生意想不到的效果。建议如下:
1. 荧光定量PCR的循环数设为35左右。
2.省略繁琐的、较难操作的核酸提取过程。
若是猪场发生了疑似非洲猪瘟的急性发病或死亡的病例,紧急、快速判断技术的具体操作过程建议如下:
1.用棉签沾取液体样品(唾液、血清、粪尿上清、透明组织液……),迅速放置于核酸免提液中。
2.按照常规荧光定量PCR试剂盒的要求加入上述核酸免提液,如5ul,10ul,……
3.循环数设为35左右。
若是出现阳性结果,诊断过程宣告结束。
如果未能获得结论,则需进行常规的核酸诊断程序,做出更加准确的判断。建议使用手动膜法过柱提取核酸,采用(50循环、起跳即阳)原则进行综合判断。
其他类似的病例(如猪瘟、猪繁殖呼吸综合征、环状病毒、猪流行性腹泻),均可以参照此方法进行免提取快速核酸扩增。