中国农业大学动物医学院副教授周磊
2020-02-12
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1 ASFV相关采样
1.1 采样动物的选择
关于采样动物的选择，有几个原则：第一，出现典型病例时，可能已经进入暴发期，此时应在安全条件下剖检有典型临床症状的动物，采集脾脏、淋巴结等脏器。第二，出现发烧、减料、流产以及不明原因死亡等异常猪的时候，第一时间隔离，然后进行检测，等待结果出来后，再对周围的环境或猪群进行进一步的检测。第三，抽检时优先选择生长迟缓、精神状态差的猪。第四，基于风险评估的抽检，对出现临床症状的临近动物要进行检测，要进行跟动物移动相关联的针对性采样，出现风险升高事件之后的回顾评估检测（譬如发现拉猪的人员出现了净区和污区的交替跨越），根据生产数据阈值报告（SPC)出现预警后的针对性检测，对具体问题进行具体分析。
1.2 样品选择
样品的选择：第一，如果要进行抗体、抗原的检测，可采全血，也可以采集病死猪或者剖检猪的脏器，包括脾、淋巴结、扁桃体、肾脏等。如果是活的猪，我们可能会通过鼻腔拭子或全血进行检测。如果要检测抗体，一般是进行凝血，就是采集血清或口腔液进行抗体检测。
组织样品的采集，建议不轻易解剖病死猪，避免在猪场中形成二次污染和二次传播，应远离猪（舍）场进行病理剖检，剖检后要及时做好无害化处理及人员的洗澡、消毒等，注意剖检兽医或其他人员的回场回岗流程。可采集脾、淋巴结、扁桃体和肾脏用于病原检测。
血液样品采集，一般情况下如果是检测抗原可以采全血，包含淋巴细胞，可以增加检出率，推荐使用EDTA来进行抗凝，因为肝素会影响PCR的效率。如果是采血清，一般会用采凝血，但如果是发病的猪，有些可能会出现凝血比较差的情况，因为血小板消耗得太多。另外，如果出现疑似病例，应先隔离再采样。血液中的病毒含量高，因此，要尽量减少在猪舍内进行采血操作，以减少血液散毒污染风险。
口腔液的采集，以栏舍为单位检测，可以作为广泛性的监测，不仅可以监测猪群，还可以监测环境的带毒情况，相对来说可以减少采样的频率。但是一定要使用敏感性的方法，保证能够检出足够少的病毒。如果猪群中有一些精神状态不好的猪，可能不愿意去咬棉绳，这就相当于把一些可能有病的高风险猪排除掉了，所以在进行检测的时候一定要注意观察，如果有必要可对猪进行单独的处理。
1.3 样品采集数量和频率
关于采样的频率和数量，以前我们的监测会基于流行病学的分析，通常会考虑置信区间以及流行率，还有易感动物的易感性。在95%的置信区间、10%的阳性率情况下，通常计算出来可能30个左右的样品就够了。但是在非洲猪瘟的流行和传播过程中，其流行率可能在初期的时候非常低，可能在1%，可能就需要采集大量的样品才能检测到。所以，我们应该基于风险和成本的考虑，去检测一些高风险、出现疑似症状的异常动物。
1.4 样品送检包装要求
第一，减少因送样导致的污染扩散。可以进行消毒，或采用标准包装，以减少可能带来的污染。第二，对唾液样品要进行冷链运输。因为唾液里含有酶或者可能会对其中的核酸有破坏作用，影响检出效率，所以推荐进行冷链运输或者添加酶抑制剂，避免降解来增加检出率。
