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非洲猪瘟专题-诊断专项自己的检测能力

李曼养猪大会 2019-12-24

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检测指将在临床实践中用于区分目标疾病和其它状态的测试。优秀检测的理想特征:准确(与参考标准比)、精确、可用、方便、低风险、便宜及可重复。   
  一、清楚自己的检测能力十分重要(约翰·迪恩,美国明尼苏达大学)
  
  检测指将在临床实践中用于区分目标疾病和其它状态的测试。优秀检测的理想特征:准确(与参考标准比)、精确、可用、方便、低风险、便宜及可重复。
  
  如何量化衡量检测的准确性?
  
  效果方面:敏感性和特异性,阴阳性预测值,阴阳性可能比例;
  
  精确方面:置信区间;
  
  可重复方面:在相同条件下对同一个体进行多次测试时,测试能够给出一致结果的能力
 
非洲猪瘟专题
  
  敏感性:疾病阳性=TP/(TP+FN)
  
  特异性:无疾病的阴性=TN/(TN+FP)
  
  阳性预测值:阳性指标测试中的患病率TP/(TP+FP)
  
  阴性预测值:阴性指标测试中的无病率TN/ (TN+FN)
  
  敏感性:
  
  敏感性告诉我们阳性检测如何能很好地检测出感染
  
  它被定义为测试阳性的小部分感染
  
  它的补充是假阴性率,定义为测试阴性的感染者比例
  
  敏感度和假阴性率加起来为一
  
  特异性:
  
  特异性告诉我们阴性测试如何很好地检测感染
  
  它被定义为未感染者呈阴性的比例
  
  它的补充是假阳性率,定义为测试呈阳性的未感染者的比例
  
  特异性和假阳性率加起来为一
  
  预测值:
  
  阳性预测值是指所有感染的检测呈所占的比例
  
  阴性预测值是所有没有感染的阴性测试结果中所占的比例
  
  更改阈值进行测试
  
  当疾病由连续测试的阈值定义时,可以通过更改阈值或截止点来更改测试特性
  
  降低阈值可提高敏感性,但通常以降低特异性为代价(即假阳性更多)
  
  提高阈值可提高特异性,但通常以降低敏感性为代价(即更多的假阴性)
  
  检测敏感性和特异性的关系
  
  接受者操作特性(ROC)曲线,在敏感性和特异性之间“权衡”, 45°线-测试时没有歧视数值
 
临床非洲猪瘟检测
  
  因此在做临床非洲猪瘟检测时,明确自身的检测能力十分重要。
  
  二、使用非洲猪瘟标准物质来确保检测结果的有效性(原霖,中国动物疫病预防控制中心)
  
  2.1 ASFV B646L (P72)基因质粒标准物资
 
临床非洲猪瘟检测
  
  2.2 不同检测方法的最低检测限
 
临床非洲猪瘟检测
  
  2.3 临床样品中的病毒含量?
 
临床样品中的病毒含量
  
  三、当前ASF场景下诊断测试的QA/QC:比以往任何时候都重要(法比奥·万努奇,美国明尼苏达大学)
  
  3.1 质量保证和质量控制的的主要测试流程是监视、确认和改正;
  
  3.2 诊断测试中的开发和验证是为达到预期目的而适当开发、优化和标准化诊断分析的过程;诊断测试:真实场景下的解释,如果由于取样或处理的原因,目标病原体不在样品中,则有完美分析灵敏度的分析将无法给出阳性结果,高分析敏感性不能确保可接受的诊断灵敏度;诊断试验保持了很高的分析特异性,但由于外部污染而导致误诊,交叉污染可导致假阳性反应,降低诊断特异性。
  
  3.3 诊断实验室质量保证/质量控制:质量手册,要求/承诺;系统策略,我们怎么认识他们?;标准操作程序,具体说明;表格和记录,可追溯性记录。
  
  3.4 没有一个完美的诊断测试,但是有一个全面而完善的过程来开发和验证诊断测试=可靠和一致的实验室结果,了解诊断测试的优势和局限性对于在群体层面(畜群、综合系统、地区、国家)建立支持健康和管理决策的现实期望至关重要。质量保证/质量控制程序:高标准可持续性实践。
  
  四、非洲猪瘟病毒的唾液学检测技术(樊福好博士)
  
  4.1 唾液学检测的优势
  
  猪群实施无创性体液检测;动物福利和生物安全的要求;防控成效大于血液学检测。
  
  4.2 唾液样本的采集方法
  
  猪群保持自由饮水;猪群停料12小时(夜间);采样方法:单采+群采;采集袋采集采样。
 
唾液样本的采集方法
  
  4.3 唾液样本保存
  
  抑制(非灭活)酶活性(氧钒核糖核苷复合物等);保持细胞结构的完整性;保持核酸一级结构完整性;冷藏/冷冻(无抑制物,不得冷冻);重视样品的非洲猪瘟病毒数量半衰期。
  
  4.4 窗口期检测的基本要求
  
  核酸提取试剂盒的高效性和敏感性
  
  4.5 定点清除(拔牙)
  
  出现可疑;检测确认;清除单元格
  
  4.6 非洲猪瘟的未来之路
  
  选择:营养冗余+带毒生产;选择:定点清除+净化生产
  
  4.7 非瘟防控秘籍
  
  秘籍:深挖洞;广积粮;用火烧;筑高墙
  
  五、为什么新一代检测-剔除法控制非洲猪瘟正在我国取得成功(闫之春老师,新希望集团)
  
  5.1 采样和鉴别诊断方法有理论基础
  
  猪群感染早期是可以在大规模出现临床症状前,通过检测可以发现病毒;
  
  攻毒后,不同个体的临床症状、病毒血症出现时间有差异。但是病毒血症比临床症状出现早,可以qPCR检出!
  
  在明显的临床症状出现之前,qPCR方法确切地检测出ASFV DNA,是能够实现,提前剔除的基础。
  
  5.2 病毒本身的特性
  
  ASFV在舍内、场内传播十分缓慢。完全可以实现早期发现,群内精准扑杀,进行病毒净化。
  
  出现ASFV后的环境中,病毒的感染力可能很快失活。完全可实现群内精准扑杀,进行病毒净化。“拔牙”
  
  猪场之间,甚至同舍猪群内,空气传播ASFV的几率很低。是我们能实现定点扑杀,全群净化的基础。对于`很大`的ASFV,舍内跨栏传播,除了直接口鼻接触外,更可能是较大尘粒、飞沫的物理携带。意味着舍内防尘、除尘,可能对降低传播程度,有实际意义;同时也给发病群,早期诊断,精准扑杀,提供了理论基础
  
  5.3 环境清除
  
  通过火焰、热风机烘干,环境中的ASFV可被消除, 先检测,再清理,防污染。分小格定点清除!
  
  ASFV的半数死亡期,粪中,4° C条件下,0.65天,37° C条件下,0.29天;尿中,4° C条件下,2.19天,37°C条件下,0.41天;口腔液,4° C条件下,2.75天,37° C条件下,2.60天;
  
  5.4 总结
  
  1)高效且可靠的鉴别诊断方法:采样方法快速、全覆盖,不合规疫苗免疫,给鉴别真的造成额外的困难!
  
  2)病毒自身特性:(场舍间)是否空气传播,(舍内)传播是否容易?
  
  3)环境污染不难清除。
  
  4)成本合理:检测成本,剔除成本,维持阴性成本。
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