两个试验为我们揭示了ASF在猪栏内以及相邻的猪栏间,还有通过空气传染给同舍内其它的猪的渐进过程。
核心摘要:
1、病理检查的发现:死后检查可见淋巴结肿大、出血和水肿,尤其是胃、纵隔淋巴结。在一些猪,这种损害是观察到在大多数固有淋巴结。其他病变包括扁桃体暗色和水肿,有时伴有脓疱或出血,脾出血,肾皮质很少有点状出血,膀胱壁(一只猪)瘀斑,结肠粘膜最尾部出血。在一些猪中,观察到含有腹水和白兰地液体状态的心包积液。有时,在尸检的过程中持续出血,偶尔在腹腔中发现大量的血液。
2、传播依赖于接种猪的分泌物或排泄物,但传染效率远没有血液来得快。这项研究的结果与血液是一种非常有效的感染源的观点一致,因为在感染后期采集的血液中病毒滴度往往高于鼻腔和直肠拭子中观察到的病毒。并且,基于我们的发现,感染病毒的分泌通过鼻腔口腔或者直肠拭子的检测表明似乎是间歇性或不存在(例如在口腔拭子中),不会导致环境中高水平的病毒含量。接触的效率决定的感染的速度。
3、在猪(1米)上方1米做空气收集发现病毒,且能感染一米过道对面的猪,证明通过空气的传播是ASFV在猪场内传播的一个非常重要的模式。从空气传播到非瘟症状出现在研究a中用了12天左右,在研究b中用了15天左右。实际上在空气被扰动的状态下,空气隔栏传染的时间会比这短得多。
4、qPCR方法对全血具有较高的敏感性,其中的病毒DNA载量较高。所以用这种方法,直肠试子和EDTA血试子能更早的检测出病毒DNA(直肠有时会出血),比口鼻试子早2天以上。
实验内容:
丹麦科学家在封闭的猪舍内做了两个有关非洲猪瘟在舍内猪群传播的模拟试验,该试验证实非洲猪瘟病毒(ASFV)在猪舍内是可以通过空气近距离传染的。在猪场内部空气传播是一种非常重要的传播方式。这两个试验为我们揭示了ASF在猪栏内以及相邻的猪栏间,还有通过空气传染给同舍内其它的猪的渐进过程。我们现在把这个试验过程以及结果介绍给大家,让大家对舍内的感染过程有个充分的认识。
试验用了两个猪舍五个猪栏,一个猪舍的一栏猪作为对照,另外一个猪舍用来做感染试验。接种后的第二天,即感染后(post infection day,PID)1天健康猪从第4栏移入第1栏,用来做栏内接触感染。从感染0天,另一栏健康猪饲养在第2栏,第1栏,用来做栏间接触感染。这些猪被允许鼻子通过栏杆接触第1栏,这些栏杆把第1栏和第2栏隔开。第3栏的猪通过第1和第2号栏之间走廊(1米宽)分隔开。第3栏中的猪不允许和第1、2栏有任何直接接触,只能通过空气病毒传播。为了避免经由设备和/或人员间接传输病毒,这些猪都使用单独的设备。
黑点,代表栏1接种病毒的猪,接种后第一天会有健康猪(白色方块)转入此栏做栏内直接接触感染过程试验;
白色方块,代表黑点猪接种后转入的健康猪;
黑菱形,代表与栏1能间接接触的的隔壁栏的健康猪,它们与栏1之间能够通过栏杆直接接互相接触;
白点和灰色点,代表栏3中的空气接触的健康猪,这些健康猪与对面的栏1栏内接触猪和栏2的隔栏栏间接触猪只有一米过道的间隔,猪只能通过空气互相接触而不能直接接触也不能通过分泌物接触,更没法通过血液接触。
栏4开始用来暂时装健康猪,在栏黑点猪接种后,就把栏4的猪移入栏1。
栏5是在另外的一个封闭猪舍内的健康猪,作为对照组,在整个试验过程中安然无恙。
试验开始后每天记录每头猪的临床评分和直肠温度。每天的总临床评分(CS)是根据与Pietschmann等人所描述的系统稍作修改的系统计算的。(2015年)。临床总评分计算为10个类别的得分之和(表1),最大临床总得分为42分。存在临床症状被定义为临床评分CS>3。在不同的时刻(包括安乐死方式处死后)采集了未加抗凝剂的不稳定血液、加EDTA稳定血液(EDTA血液)和口拭子、鼻拭子和直肠拭子。
用于ASF的传播研究的临床体征和相应临床评分:
空气样本的收集方式为:每个样本在5分钟内收集,每个样本取样约1升空气。空气样本是在栏地板的正上方且猪体高上方1米处收集的。此外,在接种之前和接种后2、5、8和11天,从栏1和栏3之间的走廊和对照组的猪舍收集了空气样本。此外,从病猪鼻约1-2厘米处采集了样本(猪呼吸的空气)。
采用定量实时聚合酶链反应(qPCR)的ASFVDNA检测从EDTA血、血清、鼻拭子、口腔拭子和直肠拭子中提取DNA。
试验发现,在这些研究过程中,对照组没有观察到感染的临床迹象,也没有在血液样本或从对照猪获得的鼻腔、口腔或直肠拭子中检测到ASFV DNA。
平均来讲,栏内直接接触感染猪(栏1)会在随后的 8.3 ± 1.5天, 栏间的间接接触感染猪(栏2)在10.0 ± 0.8天和空气接触猪(栏3)12.8 ± 1.0天,也分别表现症状。临床症状出现时间与血清感染病毒或病毒DNA检测时间无显着性差异(P>0.05)。EDTA 血样通常在相应血清的前一天进行qPCR检测呈阳性。病毒血清DNA的水平一直比那些EDTA血中的低。
在此研究中,鼻腔内接种后观察到的潜伏期是6 ± 2.7天(研究a)和6.3 ± 1.3天(研究b)。在出现病毒血症前仅靠在扁桃体及咽后淋巴结最初的复制的时候,猪向体外排毒的可能性也是不能排除的。这项研究的结果与血液是一种非常有效的感染源,因为在感染后期采集的血液中病毒滴度往往高于鼻腔和直肠拭子中观察到的病毒。在所有的猪中,开始感染前的表观潜伏期/时间在EDTA血中要比相应的血清短。EDTA血中比血清中能更早的检测出来病毒可能是由于病毒和血液的细胞部分之间的关联,用加了稳定剂的全血(EDTA血)检测比用血清检测DNA更准。
在接种后6天在空气接触猪鼻拭子中检测到低水平的病毒DNA,第2天在栏 3的空气样本中检测到病毒DNA。然而,直到检测后的5-6天这些猪才开始发病。病毒成功地通过空气感染同舍的猪,证实了从病猪身上流出的传染性病毒可以通过空气在短距离内传播。通过空气的传播是ASFV在猪场内传播的一个非常重要的模式。
两个试验的结果如下表:
ASF的传播研究结果:估计接种猪的平均潜伏期和潜伏期,估计的临床症状开始(临床评分>3被认为高于阈值)的时间和接触猪群的传染性开始的时间。
研究a
研究b
ξ接种后平均天数(±标准差);§ 暴露天数(±标准差)的平均天数;#qPCR结果;+ 病毒分离结果;CS代表临床评分,CS>3即认为感染的临床症状出现。
以上两个试验的数据都说明了圈舍内非洲猪瘟是可以通过空气传播的,但比栏内的直接接触的感染要慢得多,最快的感染方式是直接接种,血液是最有效的传播方式。栏间的感染并不比栏内的直接感染慢多少,一般在出现症状之前血清分离病毒和试子检测全血检测都能提前检测出来,但临床症状的出现在大多数情况下要比DNA检测置后。