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译者的话：
人员入场隔离期多长时间合适？4晚、7天、14天？在即将来临的低价低利润养殖时期，任何成本的浪费或者冗余都会降低企业的竞争力，隔离期的长短不仅仅是劳务成本的增加，相应隔离设施、检测、物流成本也会增加。本实验在长达近四年观察监测期中，多角度的对比不同生物安全措施/等级和隔离期对蓝耳病（美国高致病性毒株）和气喘病传播的影响：14-16个小时的淋浴更衣换鞋+隔离是可以阻断蓝耳病毒和气喘病的传播的，累计45分钟的淋浴更衣换鞋隔离期在短期对比实验中也显示了有效性。这个实验结果是对既往较长的隔离期的一种挑战，也是对包括非瘟在内其他疫病的隔离期的设定的一种思考，抛玉引玉，期待着国内有类似的研究信息共享。
同行评审
一晚的隔离时间可以防止猪繁殖和呼吸综合症病毒和猪肺炎支原体通过人员和污染物(靴子和工作服)传播
概要
本文总结了长达4年(1438天)的观察记录，关于一晚的隔离时间对防止猪繁殖和呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体通过人员和污染物在猪群间机械传播的能力。结论十分令人惊讶！
关键词：猪，猪繁殖和呼吸综合症，隔离，人员，污染物
长时间限制与其他猪群接触过的人员进入养猪场的做法(隔离)是全球养猪业中一个极具争议的话题。多年来，尽管缺乏数据来支持这些隔离时间的科学性，但为了减少人员将病原体引入农场的风险，猪场都在实施从48小时到96小时不等的隔离时间。在文献中，Sellers[1]等人调查了人们接触感染猪只后携带口蹄疫病毒的能力。结果表明，在暴露后28小时，一个人的鼻拭子阳性，但在暴露后48小时，没有出现阳性。然而，尝试复制这些结果的并没有成功[2]。同样，Amass[3]等人报道，在接触感染猪5和24小时后，可分别从指甲冲洗和鼻拭子重获猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV) 的RNA。然而，在这些样本中PRRSV的生存能力没有被证实，也没有观察到传染阴性哨兵猪。最后，Otake[4]等人从接触感染动物的人员的手、靴子和工作服中重获了传染性的PRRSV病毒，并证明传染给了阴性哨兵猪。然而，这项研究还表明，在不考虑隔离的情况下，基本的卫生干预措施，如淋浴、更换衣服和鞋类，可以防止PRRSV的机械传播[4]。总之，这些数据对延长隔离时间的价值提出了挑战；因此，为了更好地理解这一风险，我们总结了关于一晚的隔离时间防止猪繁殖和呼吸综合症病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhyo)通过人员和污染物(靴子和工作服)从感染猪群向易感猪群传播能力的观察。
材料和方法
本研究采用明尼苏达大学动物护理和使用委员会批准的方案进行。
设施
我们的观察记录与一项为期4年（2006-2010）的PRRSV和Mhyo在猪疾病净化中心生产区域模型(明尼苏达州圣保罗)进行的区域传播和生物安全性评估相结合[5,6]。在本报告中，我们将重点关注在为期4年的区域传播和生物安全项目中使用的三个设施的活动：猪群本身、场内人员住所和高级别生物安全的猪舍(图1)。
该猪群为300头25- 120公斤的猪只，这些猪只在1 - 4年内试验接种了PRRSV MN-184，在2 - 4内年试验接种了Mhyo菌株232[5,6]。这是一个持续流通的猪群，因此，在整个四年的研究期间，该设施从未被清空。新到的猪只，大约6到8周龄，每2到4周进入该设施，这取决于当前研究的实验设计[5,6]。新进猪只被放置在与现有猪群相邻的围栏中，允许鼻子对鼻子的接触，使得病原体从被感染的动物传播到未感染的动物。在整个研究过程中，记录了猪群呼吸系统疾病的临床症状以及PRRSV和Mhyo在猪群内的排毒情况，发现年死亡率为10% - 12% [5,6]。
现场住所是猪病净化中心的一所房子，作为工作人员的淋浴进出设施，以及一处农场专用衣物的洗涤和鞋类的消毒场所。
最后，这个高级生物安全设施有10只猪，它们在整个项目期间无PRRSV和Mhyo感染。这一设施使用的是猪群全进全出原则；因此，第1年每2周一次(1年共26批猪)，第2 - 4年每4周一次(2 - 4年共39批猪)都有新一批猪进入。该设施的生物安全计划包括一系列经过科学验证的干预措施，针对PRRSV和Mhyo的所有直接和间接传播途径，包括一个空气过滤系统，旨在防止引入受PRRSV和Mhyo污染的生物气溶胶[5-7]。
时间周期和活动事项
同样，本着本报告的目的，我们将重点关注在为期4年的区域传播和生物安全项目中每天发生的三个具体事项周期：污染期、清洁和隔离期以及监测期。污染期大约每天发生在中央标准时间(CST)下午2点到4点之间。这段时间的目的是让研究人员接触受PRRSV和Mhyo感染的动物。在污染期间，工作人员进入该设施的所有11个大栏内，在那里他们饲喂动物、清理大栏地板、治疗病猪、移走死猪并完成必要的维修工作。在一个常规的工作日里，会有一到两个人进入每个设施。每个月，工作人员还标记并销售育肥猪，并对猪群进行抽样，以检测PRRSV和Mhyo的状态。每天污染期结束后，工作人员离开设施，并开始清洁和隔离期。
清洁和隔离时间在污染期之后立即开始，大约从下午4点持续到第二天上午6点，中央标准时间(CST)。这个时期的目的是中和污染期的影响。在此期间，工作人员从猪场去往住所，在那里他们脱掉农场的衣服和鞋，洗澡，穿上自己的衣服和鞋子，并从当天下午大约4点到第二天早上大约6点避免与猪接触。用7%戊二醛和26%季铵盐(辛力加；国际保护协会，亚特兰大，乔治亚)对衣物和鞋类进行消毒。第二天中央标准时间(CST)大约早上5:30，工作人员再次洗澡，穿上干净的农场专用服装衣物和鞋子，进入高生物安全级别的设施内，开始监测阶段。
监测期是与该报告有关的第三个也是最后一个事项期，监测时间为每天中央标准时间(CST)上午6时至8时，在该高生物安全设施内进行。这个时期的目的是衡量在清洁和隔离期间所采用的做法的有效性。具体来说是测量两个结果：对人员进行PRRSV和Mhyo检测，以及检测设施中饲养的哨兵猪的PRRSV-Mhyo状态。清洁和隔离时间结束后，工作人员立即从住所前往距离约100米的高级别生物安全设施。进入设施专用接待室后，立刻进行拭子检查，以确定人员、衣物和鞋类上是否存在PRRSV RNA或Mhyo DNA。为了收集样本，涤纶拭子(Fisher Scientific, Hanover Park, Illinois)浸入含有3%胎牛血清的微量培养基(MEM)中(Difco, Detroit, Michigan)，并以“之”字型在每个人的头部、面部、颈部、躯干、手、手臂和腿上滑动擦拭。然后将拭子保存在-20℃的MEM中，直到收集后24 - 48小时进行实验室分析，以保持病毒完整性并最大化检测敏感性。取样后，穿上设施专用的靴子、工作服和手套，并用7%的戊二醛和26%的季铵盐对靴子进行消毒。工作人员随后进入猪群内，喂猪，打扫围栏。此外，每周对这10头猪进行健康诊断评估，包括对呼吸道疾病的临床症状进行目视观察，对所有10头猪进行血液检测和鼻腔擦拭。在采集之后，明尼苏达大学兽医诊断实验室(明尼苏达圣保罗MN VDL)通过聚合酶链反应(PCR)对人员、污染物和动物的所有样本进行了PRRSV RNA和Mhyo DNA的检测[8,9]
控制组 Controls
除了每天对动物、人和无生命物体采样，还进行了两套控制实验，即PRRSV扩散控制和PRRSV隔离期控制。这些控制不包括Mhyo，因为它们是在研究的第一年执行的，那时PRRSV是之前在猪群中接种的唯一病原体。
传播控制的目的是记录PRRSV是否通过人员和污染物接触感染动物后传染给哨兵猪(图2)。在连续5天内，1人接触了猪群内的感染动物，然后在不经过任何基本清洁措施(淋浴、洗手、换工作服和靴子)的情况下到高级别生物安全设施中立即接触了阴性哨兵猪(10头6至8周大的猪)。
隔离期的控制的目的是记录人员和污染物所造成的PRRSV传播是否可以通过基本的清洁措施来防止(图3)。连续5天，有1名人员在猪群中接触了感染的猪，然后立即去往高级别生物安全设施接触哨兵猪，那里有10头6至8周龄的阴性哨兵猪。在进入高级别设施之前，这名人员在接触不同组的猪之间都会洗澡，更换工作服和靴子，但没有遵守指定的隔离时间。对照组被分开圈养，以防止直接和间接接触。
按照上述情况进行日常动物护理，使每组动物和工作人员之间有广泛的身体接触。此外，如前所述，在指定地点采集日常工作人员拭子和污染物拭子(图2和图3)。另外，两个对照组的哨兵猪在第0天(抵达哨点设施时)、第5天(5天接触期结束时)和第20天(接触期结束后15天)进行了血液检测。在MN VDL通过PCR检测血液样本是否存在PRRSV RNA。
图1：各设施及人员日常流动示意图。
研究人员每天在现场住所淋浴并穿上干净的衣服和鞋子，之后进入高级生物安全设施(空气过滤的)，穿上干净的衣服和靴子并洗手，然后进入有猪的区域，这些猪是猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)和肺炎支原体(Mhyo)的双阴性猪。在与动物接触之前，采集手上、工作服和靴子上的拭子，用聚合酶链反应检测PRRSV RNA和Mhyo DNA。在完成动物护理任务后，工作人员进入猪场，那里有300头感染了PRRSV和Mhyo的猪只。完成动物护理工作后，工作人员重新进入住所，他们在那里洗澡，穿上干净的衣服，并保持1晚不接触动物。第二天早上，重复此过程。这种人员流动模式重复了1438天。
图2：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)传播控制实验中的人员流动总结图。
该实验的目的是证明在没有特定生物安全控制的情况下，PRRSV可以通过人员和污染物从受感染的猪群传播到阴性猪群。对照实验连续进行5天，每天在进入高级别生物安全设施时从手、工作服和靴子上采集棉拭子，并用聚合酶链反应检测PRRSV RNA。
图3：猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)隔离期控制实验中的人员流动总结图。
该实验的目的是记录是否可以采取基本的卫生措施来防止通过人员和污染物造成的PRRSV传播。控制方案连续进行了5天，包括人员在淋浴和更换衣服和鞋类后从PRRS阳性猪群直接前往高级生物安全设施。在进入后一个设施时，采集手、工作服和靴子上的拭子，并通过聚合酶链反应检测PRRSV RNA。
结果
在为期1438天的研究期间，共有25名人员参与了上述设施之间的活动。分别采集和检测了7174个人员样本和4833个污染物样本（PRRSV RNA和Mhyo DNA检测）。在4年的研究期间，所有拭子均为PCR阴性，且高水平生物安全设施中饲养的所有动物( 480只)均为PRRSV阴性和Mhyo阴性。清洁和隔离时间每天大约持续14至16小时。
在扩散控制实验中，观察到PRRSV的二次机械传播是由接触受污染的人员和污染物引起的。暴露第5天，10个哨兵猪中有5个PRRSv阳性，而暴露第20天，10个哨兵猪中有10个PRRSv阳性。此外，在与猪群中的受感染动物接触后进入高生物安全设施时采集的人员和污染物标本，其中45个棉签中有40个检测到PRRSV RNA。
相反，PRRSV在隔离控制期内到哨兵猪的传播被阻止，因为所有哨兵猪在测试期间保持PRRSV阴性。在所有5天暴露时间中，直到离开猪群，在人员和污染物的45个棉拭子中有42个检测到PRRSV RNA。在淋浴和更换靴后进入哨兵猪设施时采集的所有拭子(45 / 45)均为PCR阴性。不同组的猪只间，人员洗澡、换工作服和靴子的时间大约是45分钟。
讨论
在撰写本报告所用的条件下，隔离时间为1晚(持续14至16小时)防止了PRRSV和Mhyo在感染猪群和易感猪群之间通过人员和污染物传播。虽然这些信息本质上是观察得出的，并且是在模型条件下收集的，但它对延长隔离时间的有效性提出了挑战。
另外，虽然以前报道过关于数据描述污染物和人员机械传播PRRSV的能力[4,5]，以及降低这些风险的干预策略的研究，但这项新研究是新颖的和严谨的，因为这些观察是经过一段长时间收集的，涉及众多人员，采用广泛的基于抗原的取样程序，包括一组基于PRRSV的控制实验。
遗憾的是，由于研究设计的限制，大量的对照，以及一组Mhyo对照，不能包括在内。此外，本研究不需要采集人员的鼻拭子。这一决定是基于之前的一项研究中[3]，从人类鼻腔样本中重获的PRRSV RNA仅限于暴露48小时后收集的单个样本。这是作者的观点，如果这的确是一个真实的结果，那么我们预期检测到的频率将更大，最初检测到的时间应该发生在暴露后的早期，而病毒也会在更多的研究人员身上被检测到。最后，由于我们的研究周期很长，而且过程的侵入性，因此不可能在如此多的参与者中强制执行。
总之，尽管这些观察结果很有趣，并且有潜力提高养猪业人员隔离政策的有效性，但显然还需要更多的研究来调查和澄清这个问题。例如，由于这些观察结果仅适用于PRRSV和Mhyo，我们不知道它们是否可在其他病原体中使用，如猪圆环病毒2型或猪流感病毒。最终，我们也没有确定防止病原体传播所需的最短隔离时间。基于这些关于PRRSV和Mhyo的观察，任何时长的隔离都可以被认为是“浪费的时间”。但是，由于我们的对照使用不包括Mhyo，所以在没有更多数据的情况下，我们仍无法得出任何肯定的结论。
理想情况下，如果未来的研究可以回答这些问题，并且可以在整个行业的决策者之间进行有组织的讨论，也许可以在行业领导者之间达成一致，从而形成一个国际性的隔离计划。在此之前，我们希望从该报告中得到的观察将会在早期的适应者之间发起讨论，指导决策制定，并促进那些已经被这些数据说服的人所拥有和操作的体系之间的变化。
