一、概述
猪圆环病毒3型(PCV3)于2016年在美国首次被发现以来,我们对该病毒诱导机体产生的体液免疫反应的了解仍然相对匮乏。目前对PCV3诱导机体体液免疫反应的了解主要是基于PCV3 Cap蛋白诱导抗体的血清学调查方法确定的。而对于自然感染猪圆环病毒3型(PCV3)母源抗体的特点和实验感染生长猪后抗体动态尚未得到详细的的阐述。本篇文章采用Cap蛋白和Rep蛋白特异性酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)方法揭示了母源抗体的持续时间及自然感染后抗体的变化动态,增加了对PCV3诱导机体体液免疫反应方面的认识。
二、研究方向与试验方案
2.1自然感染PCV3母猪所产仔猪的母源抗体动态
美国爱荷华州某农场曾感染PCV3。该场发病特征为母猪出现流产风暴,流产率约为40%。PCR检测后无PCV2、PRRSV和PPV的感染,而流产胎儿组织进行PCR检测后,证实存在PCV3的感染。随机对其中一个分娩前2周的妊娠单元采用PCV3 Cap蛋白间接ELISA方法进行横断面评估,PCV3血清阳性率达到50%。随机选取3窝31头仔猪(第1窝,8头;第
2窝,11头;第3窝,12头)按低、中、高的母源抗体水平纵向研究。所有仔猪均在产房饲养21天(±3天),在哺乳期间没有进行交叉饲养。在断奶时,所有的仔猪被重新分配到一个保育舍中,并与来自同一农场的仔猪混合饲养。从分娩后1至9周,每周采集一次血液样本送实验室检测Cap蛋白和Rep蛋白抗体。
2.2 生长猪接种PCV3后抗体动态
18头5周龄PCV3抗原阴性仔猪随机分成4个试验组。试验组一为PCV3阳性样品感染组,6头;试验组二为PCV3阳性样品+佐剂感染组,6头;试验组三为佐剂(KLH)组,3头;试验组四为阴性对照组,3头。试验组一和试验组二PCV3阳性样品为肌注2mL的组织匀浆样(1.04 × 1011 mL−1)+鼻内接种2mL的组织匀浆样3.38 × 1012 mL−1,7天后重复接种一次。其余组的接种方案与此相同。所有试验组分别在接种后0、3、7、10、14、17、17、21、24、28、31、35、42 天时,采集血清5 mL送实验室检测Cap蛋白和Rep蛋白抗体变化情况。
三、试验结果与分析
3.1自然感染PCV3母猪所产仔猪的母源抗体动态
采用PCV3 Cap蛋白和Rep蛋白间接ELISA和IFA对3窝仔猪(共31头仔猪)分娩1-9周后的体液免疫反应进行了纵向评估。所有仔猪IFA均检测到Cap IgG抗体。此外,2窝仔猪中检测到Cap IgG抗体,而1、3窝仔猪在同一时间点未检测到Cap IgG抗体。所有仔猪的Cap IgG IFA抗体滴度和ELISA S/P比值均在分娩后1-2周达到最高,并在7-9周之间下降到几乎无法检测到的水平。
对于Rep蛋白 IgG反应,IFA未在第1窝仔猪中检测到抗体。然而,在分娩后1周的第二窝和第三窝仔猪体内可100%检测到Rep IgG抗体。与Cap IgG抗体相比,Rep IgG抗体水平下降得更快,产后6周已检测不到Rep IgG抗体。相比之下,第二组IFA检测仔猪Rep IgG约比同一时间点观察到的最大Cap IgG滴度低了8倍。
3.2 生长猪接种PCV3抗体动态
对实验感染猪的抗体检测结果表明,PCV3 IgG抗体反应早在感染后14天时就可检测到。所有PCV3接种组在感染后35天时IFA呈阳性。
四、讨论
在本研究中,我们评估了一个有PCV3病史的商业农场中30头母猪在产仔前2周Cap蛋白抗体的存在。随机选择3窝PCV3抗体阳性母猪所产仔猪,对分娩后1-9周的Cap和Rep IgG体液免疫反应进行纵向评估。所有仔猪在产仔1周后PCV3 Cap IgG抗体水平最高,分娩后大约6-8周下降到无法检测的水平。根据先前评估PCV2 Rep IgG母体抗体的研究,PCV2 Rep IgG的母源抗体可持续到11周龄。然而,PCV2 Rep抗体的持续时间还要根据母猪抗体水平来确定。在本研究中,PCV3 Rep IgG抗体在不同窝间的差异更大,在第1窝中未检测到母体来源的PCV3 Rep IgG抗体,而在第2窝和第3窝中,抗体在分娩后约5周后降低。我们的结果表明,与Cap抗体相比,PCV3 Rep母源抗体转移到仔猪体内较少。自然PCV3感染母猪和实验性PCV3感染Rep抗体具有较短的半衰期。该结果为我们了解PCV3诱导的体液免疫反应提供了更多的数据。
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